In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与红色荧光蛋白共表达载体及其突变载体
刘超
汤斌
曾杨
于美娟
石奕武
廖卫平
1.广州医学院第二附属医院神经科学研究所,5102602.广州医学院第二附属医院神经科学研究所,5102603.广州医学院第二附属医院神经科学研究所,5102604.广州医学院第二附属医院神经科学研究所,5102605.广州医学院第二附属医院神经科学研究所,5102606.广州医学院第二附属医院神经科学研究所,510260
摘要：目的:构建Ⅰ型钠通道(NaV1.1)与红色荧光蛋白(DsRed)共表达载体及其突变载体.方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到DsRed真核细胞表达载体(pCMV-IRES-DsRed).限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-SCN1A-IRES-DsRed.将其转染HEK293T细胞,Western blot检测NaV1.1的表达.定点诱变试剂盒对其进行定点诱变.结果:成功构建NaV1.1与DsRed共表达载体,SCN1A基因所编码的第1 623位密码子由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala).结论:NaV1.1与DsRed共表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致NaV1.1功能的改变奠定了基础.
关键词：钠通道红色荧光蛋白In-Fusion技术诱变SCN1A癫痫
资助基金：国家自然科学基金(30900451)广东省自然科学基金(10151018201000021)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1908-1910 )
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