RNAi技术干扰人喉癌Hep-2细胞PTTG1基因的初步研究
王云龙1
孙新城2
徐桂超3
昌静峰3
李玉林3
王国强3
刘旺根3
董彩文3
1.郑州职业技术学院,4501212.郑州大学,河南省新乡市,4530073.河南省生物工程技术研究中心,郑州市,450001
摘要：目的:探索对人PTTG1基因mRNA序列有较高干扰效率的位点,构建对PTFGl基因的表达有较高抑制效率的重组质粒.方法:筛选、合成1对互补 DNA单链,退火为双链后与双酶切后的质粒载体连接,构建了表达短发夹RNA的1种重组质粒plk0.1-puro/PTTG1.重组质粒以不同浓度转染,并于转染后不同时间收集细胞,以β-actin为内参,采用RT-PCR和Western blot技术分别检测PTTG1基因的mRNA、蛋白质的相对表达水平.结果:与空白对照组相比,6孔板中每孔转染质粒plk0.1-puro/PTTG1 1 000 ng以上、转染超过12 d时,PTTG1基因mRNA、蛋白质的相对表达水平下降70%以上.结论:重组质粒plk0.1-puro/PTTG1,在6孔细胞培养板中以1 000 ng/孔转染12 d以上时,有效抑制了PTTG1人基因的表达,在关于PTTG1基因的研究中具有较好的应用价值.
关键词：RNAiPTTG1基因shRNA
资助基金：河南省杰出创新人才计划(084200410016)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 2913-2917 )
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