pPICZαA-CDK2重组质粒的构建及表达
黄宪章1
张战锋1
谢诗园2
李朝霞3
李林3
陈炜烨1
何敏1
庄俊华1
1.广东省中医院检验科,广州市,5101202.广州医学院检验系,5101203.中山大学附属第三医院检验科,广州市,510630
摘要：目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白.方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆.重组质粒pPICZαA-CDK2转化毕赤酵母菌株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性.结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体中;重组质粒转入酵母菌GS115,酵母经甲醇诱导表达后经SDS-PAGE检测发现在34 000左右有条带,Western-Blot检测发现有与CDK2单抗结合蛋白.结论:成功构建重组质粒,初步判断CDK2全长蛋白在毕赤酵母中表达成功且抗原性良好.
关键词：细胞周期蛋白依赖激酶2重组质粒毕赤酵母
资助基金：广东省自然科学基金(10151040701000031,07004832)广东省科技计划(20108060900069)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 2917-2919 )