稳定过表达人SIRT1基因的HEK293细胞系的建立
林蓉
张凯帆
王维蓉
林琴琴
杨莉娜
任峰
张建丰
1.西安交通大学医学院药理系,7100612.西安交通大学医学院药理系,7100613.西安交通大学医学院药理系,7100614.西安交通大学医学院药理系,7100615.西安交通大学医学院药理系,7100616.西安交通大学医学院药理系,7100617.西安交通大学医学院药理系,710061
摘要：目的:构建人沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表达载体,建立稳定过表达人SIRT1的HEK293细胞系.方法:将含有SIRT1的克隆载体pCRⅡ-TOPO-SIRT1双酶切后,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,连接产物经酶切鉴定后进行测序.构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRT1转染HEK293细胞.G418进行筛选.Real-time PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测SIRTI的表达.结果:酶切分析和测序结果证实,SIRT1基因成功插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中.Real-time PCR和Western Blot结果显示稳定转染pc:DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293细胞SIRT1的表达水平明显高于未转染细胞(P<0.01).结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了稳定过表达SIRT1基因的HEK293细胞系.为进-步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其机制奠定了基础.
关键词：心血管疾病SIRT1稳定过表达HEK293细胞
资助基金：国家自然科学基金(81072643)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 18-20 )
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