小鼠VEGFR-2胞外片段重组蛋白的制备及其在检测抗VEGFR-2抗体中的初步应用
肖博宇1
付晓1
李春阳1
夏燕2
唐淑君3
杨文1
王艳林2
1.三峡大学医学院,湖北省宜昌市,4430022.三峡大学分子生物学研究所,湖北省宜昌市,4430023.三峡大学化学与生命科学学院,湖北省宜昌市,443002
摘要：目的:原核表达和纯化小鼠血管内皮生长因子受体2 (VEGFR-2)胞外区功能片段并用于抗VEGFR-2抗体的检测.方法:用PCR技术扩增编码VEGFR-2胞外区的DNA片段,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)并转化大肠杆菌Rossetta(DE3).在尿素变性条件下用Ni-NTA树脂亲和层析纯化IPTG诱导表达的基因融合蛋白,并用抗His抗体和抗VEGFR-2抗体分别对融合蛋白进行Western blotting鉴定.ELISA法用于分析VEGFR-2胞外区功能片段在检测抗VEGFR-2抗体中的应用价值.结果:克隆获得为小鼠VEGFR-2胞外功能区(Aa 134-Aa417)编码的DNA片段并构建原核表达质粒.将上述质粒转化大肠杆菌后,高效诱导表达出VEGFR-2胞外区功能片段的融合蛋白.尿素变性条件下纯化的融合蛋白能特异性被抗His标签抗体和抗VEGFR-2抗体识别和结合.用上述原核表达的VEGFR融合蛋白建立的ELISA方法可检测样品中抗VEGFR-2抗体的含量.结论:本实验成功建立了VEGFR-2胞外区功能片段原核表达和纯化的方法,获得的VEGFR-2胞外区功能片段可用于抗VEGFR-2抗体效价的检测.
关键词：血管内皮生长因子受体2原核表达蛋白纯化小鼠
资助基金：湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队项目(T201203)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2793-2796 )
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