pET32a-PTEN融合质粒的构建与表达
张战锋
韩丽乔
庄俊华
黄宪章
1.510120,广州中医药大学第二附属医院检验科2.510120,广州中医药大学第二附属医院检验科3.510120,广州中医药大学第二附属医院检验科4.510120,广州中医药大学第二附属医院检验科
摘要：目的：构建PTEN原核融合质粒，利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法：从人新鲜外周血中提取总RNA，采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因，并将其pET32a质粒融合，化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32a-PTEN融合质粒转化入表达菌株BL21，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其蛋白表达，SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果：菌落PCR及DNA测序证实目的基因与质粒完整融合；融合质粒成功转入表达菌株BL21（DE3），SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出73 kDa左右的蛋白。结论：成功构建融合质粒，并且PTEN全长蛋白在原核表达菌BL21中完整、高效表达。
关键词：大肠杆菌PTEN融合质粒
资助基金：广东省科技计划(2010B031600126)广东省自然科学基金(S2011010004750)重大新药创制"科技重大专项(2012ZX09303009-003)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 706-708 )