CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染
段司沁1
范遥2
赵雪2
曹园芝1
谭毅3
龙北国1
马伟峰1
1.南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系广东省热带病研究重点实验室, 广州市,5105152.南方医科大学公共卫生与热带医学学院第一临床医学院, 广州市,5105153.325035,温州医科大学中美糖尿病并发症研究所
摘要：目的：构建高表达CXCR4慢病毒并转染MCF-7细胞，获得高表达CXCR4的MCF-7细胞。方法：RT-PCR法扩增CXCR4基因，构建重组质粒CXCR4／pSin-EF2，与psPAX2、pMD2G质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒，以空载体包装的病毒为对照，将包装慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7。 RT-PCR和Western blot检测转染前后CXCR4基因和蛋白的表达，流式细胞术检测细胞表面CXCR4受体表达。结果：双酶切和测序结果证实重组质粒CXCR4／pSin-EF2构建成功，转染HEK293T细胞获得高滴度慢病毒，RT-qPCR和Western blot证实病毒转染MCF-7细胞中CXCR4表达量显著增高（P ＜0．05），流式测得CXCR4阳性细胞由26．78％升到99．29％，而MCF-7Vector细胞膜表面CXCR4表达量与未转染病毒MCF-7细胞无明显差异。结论：成功构建CXCR4慢病毒表达载体，获得CXCR4受体稳定高表达的乳腺癌细胞。
关键词：CXCR4慢病毒乳腺癌细胞
资助基金：国家自然科学基金(81101732)重大新药创制"科技重大专项(2012ZX09103-301-016)广东省科技计划(2013B021800040)广东省大学生创新创业训练计划(201412121106)广州市珠江科技新星专项(2013J2200047)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2786-2789 )
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