重组慢病毒CD133-miR30-shRNA的构建及抗肝癌细胞生长的作用
牛坚
王月
刘斌
1.221002,徐州医学院附属医院普外科2.221002,徐州医学院附属医院普外科3.221002,徐州医学院附属医院普外科
摘要：目的：构建沉默CD133基因的miR30-CD133慢病毒，探讨其对肝癌细胞株SMMC7721生物学行为的影响。方法：针对已经筛选确定的 CD133基因干扰有效序列，合成靶序列的 Oligo DNA ，与 pPRIME 载体连接。用 pPRIME-miR30-CD133、psPAX2和 pMD2G 3种质粒共转染293T 细胞，包装产生慢病毒，测定病毒滴度；荧光显微镜下测定病毒感染效率；qRT-PCR、Western blot 检测 CD133表达；CCK-8法检测细胞生长；annexinV／PI检测细胞凋亡。根据实验要求（1）Blank组；（2）shNC组；（3）shCD133组。结果：病毒滴度为6．58×109 PFU／mL，病毒感染效率为（80．8±9．1）％。 qRT-PCR结果显示sh CD133组相对Blank 组的CD133表达量的平均值为0．18±0．04，sh CD133组相对Blank 组和shNC 组有显著的 CD133敲减作用（P ＜0．05）。 Western blot结果显示sh CD133组的CD133表达明显下降，约为shNC组的10％（P ＜0．05）和Blank组的8％（P ＜0．05）。重组慢病毒抑制肝癌细胞生长，与Blank 组（25．3％）、shNC 组（24．3％）相比，sh CD133组凋亡细胞比例（41．3％）显著增加（P ＜0．05）。结论：成功构建慢病毒PRIME-miR30-CD133，为CD133基因的功能研究提供了工具。
关键词：肝肿瘤干细胞CD133细胞增殖基因表达慢病毒
资助基金：江苏省333人才项目(编号Ⅲ-2290)徐州市重大科研项目(编号KC14SX011)天晴甘美基金项目(编号CFH-PC20132020)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1571-1574 )
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