人博卡病毒重组蛋白表达及间接酶联免疫法检测的建立
张允奇1
何涛君2
陆学东2
张银辉2
1.518033,广东医学院附属深圳市福田区人民医院香蜜湖分院检验科2.518033,广东医学院附属深圳市福田区人民医院检验医学部
摘要：目的：原核表达并纯化人博卡病毒结构蛋白 VP2，并建立间接酶联免疫法，用于病毒感染的检测。方法：本研究采用PCR法从菌种模板WHL-1扩增出人博卡病毒结构蛋白VP2基因片段，克隆至表达载体pET28a中，转化到菌BL21（DE3），经过诱导产生融合蛋白，使用Western blot 检测，并以该蛋白为包被抗原建立检测血清人博卡病毒的间接酶联免疫法。结果：重组原核表达质粒经双酶切鉴定构建正确，并可与人博卡病毒 IgG阳性血清发生特异性反应，建立的间接酶联免疫法最佳抗原包被浓度为2 mg／mL ，血清的最佳稀释倍数为1∶200，封闭以1％BSA封闭效果最佳，酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4000，工作时间最佳为1 h，该检测方法有较好的特异性和重复性。建立的间接 ELISA 方法 Cut-off 值为0．1，灵敏度为92％，特异性为98％，与对照试剂检测结果的符合率为97％。结论：原核表达并纯化了人博卡病毒结构蛋白VP2蛋白建立的间接酶联免疫法，为人博卡病毒的血清抗体检测方法提供了依据。
关键词：人博卡病毒原核表达间接酶联免疫法
资助基金：深圳市医疗卫生类科技计划(201303158)深圳市福田区卫生公益性行业科研专项(FTWS201310)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2803-2806 )
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