可生物素化HLADRB1*07:01蛋白的原核表达和纯化
李敏英
李文
陶爱林
1.广州医科大学附属第二医院,广东省过敏反应与免疫重点实验室/呼吸疾病国家重点实验室 广州,5102602.广州医科大学附属第二医院,广东省过敏反应与免疫重点实验室/呼吸疾病国家重点实验室 广州,5102603.广州医科大学附属第二医院,广东省过敏反应与免疫重点实验室/呼吸疾病国家重点实验室 广州,510260
摘要：目的 诱导表达可生物素化的人类白细胞抗原HLA-DRB1*07:01蛋白,以制备MHC四聚体,为后续研究肽段与MHCⅡ的结合力、检测抗原特异性T细胞提供必要工具.方法 从GenBank中获得HLA-DRB1*07:01的cDNA序列,人工合成基因片段时,α链、β链的跨膜区加入亮氨酸拉链,其中β链还在跨膜区加入Avi标签.α链和β链分别与表达载体pET-44a和pETduet-1-Bira连接后转入大肠杆菌Rosetta构建原核表达体系,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得目的蛋白,并用免疫印迹法分析鉴定目的蛋白.结果 成功构建了重组质粒pET-44a-HLA-DRB1*07:01 α链和pETduet-1-HLA-DRB1 *07:01β链-BirA,0.25 mmol/L的IPTG可高效诱导目的蛋白表达,α链可被HLA-DRA抗体特异识别,目的蛋白可生物素化且可被链霉素特异识别.目的蛋白主要以包涵体形式表达,经反复洗涤可获得高纯度的蛋白.结论 成功构建了HLA-DRB1*07:01蛋白的原核表达系统,并得到纯化的可生物素化重组表达蛋白,为进一步制备HLA-肽四聚体奠定了实验基础.
关键词：HLA-DRB1*07:01重组表达可生物素化MHC四聚体
资助基金：国家自然科学基金(81373128)国家科技重大专项(2016ZX08011-005)广州医科大学科学研究项目(2015C19)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1080-1084 )
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