广西HIV-1 B亚型假病毒的构建
黄春湲1
王洪2
梁浩3
叶力1
梁冰玉1
蒋俊俊1
陈荣凤1
宁传艺3
廖艳研3
余军1
黄颉刚1
1.广西医科大学公共卫生学院&广西艾滋病防治研究重点实验室,南宁,5300212.广西壮族自治区医学科学信息研究所,南宁,5300223.广西医科大学生命科学院&广西艾滋病防治研究重点实验室,南宁,530021
摘要：目的 针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具.方法 从质粒pSV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒pNL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组骨架质粒;采用RT-PCR方法从HIV-1 B亚型慢性感染者RNA中获得包膜蛋白基因,采用双酶切法将env基因克隆至真核表达质粒pcDNATM3.1 (+),以此构建重组包膜质粒;单转染重组包膜质粒至293t细胞验证表达;共转染重组质粒至293t细胞获得假病毒;采用与TZM-b1细胞共培养法,通过荧光表达检测验证假病毒感染性.结果 两种质粒以质量比2:1(pcDNA3.1-env:pNL4-3.EGFP.E-R-)共转染至293t细胞,48 h后收集细胞上清获得假病毒.将假病毒加入到TZM-bl细胞共培养48 h后,可以观察到荧光表达.结论 带有EGFP基因重组假病毒的系统构建成功.
关键词：HIV-1假病毒耐药检测
资助基金：国家自然科学基金(81360259)国家自然科学基金(81660334)广西自然科学基金(2017GXNSFAA198190)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1942-1946 )
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