MicroRNA-29a-3p调控转化生长因子β1诱导的人角膜基质细胞的肌成纤维细胞转化
李凌菡1
郝朋2
李轩1
1.天津医科大学眼科临床学院 天津 300070;天津市眼科医院,天津市眼科研究所,天津市眼科学与视觉科学重点实验室 天津 3000202.天津市眼科医院,天津市眼科研究所,天津市眼科学与视觉科学重点实验室 天津 300020
摘要：目的 探讨MicroRNA-29a-3p对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人角膜基质细胞肌成纤维细胞转化的影响.方法 本实验选用培养至2～4代的人角膜基质细胞,分别设置对照组、TGF-β1组、miR-29a过表达对照+TGF-β1组、miR-29a过表达+TGF-β1组、miR-29a抑制表达对照+TGF-β1组及miR-29a抑制表达+TGF-β1组.采用TGF-β1体外诱导的人角膜基质细胞向肌成纤维细胞转化,细胞饥饿过夜之后,在无血清的条件下转染miR-29a 24 h;然后以浓度5 ng/mL加入TGF-β1,无血清培养48 h.采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞总RNA提取法提取细胞总RNA,逆转录成cDNA后采用实时荧光定量PCR法检测目的相应指标的表达情况,Western Blot法检测相应蛋白的表达.结果 人角膜基质细胞呈多角形,树突状,排列规则.按实验设计处理完细胞之后,各组细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),转染效果良好.与对照组比较,TGF-β1组平滑肌肌动蛋白α(αSMA)的mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);与miR-29a过表达对照+TGF-β1组比较,miR-29a过表达+TGF-β1组αSMA mRNA表达有明显下降,差异有统计学意义(P=0.001);与miR-29a抑制表达对照+TGF-β1组比较,miR-29a抑制表达+TGF-β1组αSMA mRNA表达有明显上升,差异有统计学意义(P=0.019).同时,αSMA在蛋白水平的表达结果可得,对照组与TGF-β1组相比,αSMA的相对表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.001);miR-29a过表达+TGF-β1组与miR-29a过表达对照+TGF-β1组相比αSMA的相对表达量明显降低,差异有统计学意义(P=0.007);而该指标在miR-29a抑制表达+TGF-β1组与miR-29a抑制表达对照+TGF-β1组的比较中增高且差异有统计学意义(P=0.034).结论 MicroRNA-29a对TGF-β1诱导的人角膜基质细胞的肌成纤维细胞转化作用是负性的.
关键词：角膜基质细胞MicroRNA-29a-3p转化生长因子β1肌成纤维细胞转化平滑肌肌动蛋白α
分类号：R772.2(眼纤维膜疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81170828)国家自然科学基金(81670837)天津市应用基础与前沿技术研究计划(15JCZDJC35300)天津市卫生局科技攻关计划(14KG133)
论文发表日期：2020-01-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 44-48 )
英文信息