一种肺血管基因敲减动物模型的构建及在肺动脉高压中的运用
罗志梅1
刘虹延2
孙得胜1
1.遵义医科大学附属医院呼吸与危重症医学科,贵州遵义5630032.遵义医科大学附属医院中医科,贵州遵义563003
摘要：目的 探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用.方法 根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体.将44只清洁级SD大鼠随机分为4组:健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组.后3组大鼠分别气管内注入生理盐水(盐水模型组)、AAV1-control vector(对照病毒载体组)、AAV1-KLF4-shRNA(基因敲减组).1个月后对后3组进行烟熏造模,烟熏4个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过PCR方法测定肺动脉中KLF4水平,通过HE染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度.取大鼠心脏计算右心肥厚指数.结果 细胞计数和细胞迁移实验证实选用的KLF4-siRNA链有效.免疫荧光实验显示,经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布.荧光定量PCR实验显示,基因敲减(AAV1-KLF4-shRNA)组大鼠肺小动脉中KLF4的mRNA表达量明显低于其他两组.血流动力学检测结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的右心室收缩压和平均右心室压均明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的右心室收缩压和平均右心室压均明显低于盐水模型组及对照病毒载体组.HE染色及右心肥厚指数结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的肺小血管重构及心室重构程度明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的肺小血管重构及心室重构程度明显低于盐水模型组及对照病毒载体组.结论 肺血管特异性KLF4基因敲减模型构建成功并成功地在肺动脉高压中发挥作用,为进一步深入研究肺动脉高压的发病机制提供了平台和实验基础.
关键词：肺动脉高压基因敲减1型腺相关病毒KLF4
分类号：R544(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81960016)国家自然科学基金(82260014)
论文发表日期：2023-02-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 404-409 )
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