基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制
姜盛楠1
支文冰1
张红1
王晓婷1
孙婷婷1
许宗仁1
陈静2
李晔1
刘洋1
1.陕西省中医药研究院(陕西省中医医院)(西安 710003)2.陕西中医药大学(陕西咸阳 712046)
摘要：目的 基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱(SC)体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制.方法 采用脂多糖(LPS)刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型,给予不同浓度SC进行治疗.采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度;设Control组、LPS组(10 μg/mL LPS)、SC组(10 μg/mL LPS+不同浓度SC),ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况;RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子(MyD88)和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达;Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达.结果 MTT结果显示,LPS和SC分别在0～10 μg/mL、0～40 μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响;ELISA结果表明,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC含量极显著升高(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著升高(P<0.01);与LPS组相比,SC组细胞中MUC5AC含量极显著降低(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8 也极显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、MyD88和NF-κB p65 mRNA表达均极显著升高(P<0.01),而SC组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8 mRNA的表达显著降低(P<0.05),MyD88和NF-κB p65 mRNA的表达极显著降低(P<0.01).Western blotting结果表明,SC可极显著降低LPS诱导的NCI-H292细胞中TRAF6、TLR4、p-p38和p-p65以及细胞核内NF-κB p65蛋白表达(P<0.01).结论 SC可能通过抑制TLR4-NF-κB信号通路,改善气道炎症和黏液高分泌,进而发挥抗哮喘的作用.
关键词：槐果碱NCI-H292细胞TLR4-NF-κB信号通路炎症黏液高分泌
分类号：R285.5(中药学)
资助基金：陕西省重点研发计划(2021ZDLSF04-06)陕西省重点研发计划(2022ZDXM-SF-06)陕西省自然科学基础研究计划项目(2023-JC-QN-0820)陕西省秦药研发重点实验室(2021-QYPT-001)秦创园中医药创新研发转化项目(2022-QCYZH-006)陕西中医药大学省级中医体质与疾病防治研究重点实验室(KF2209)
论文发表日期：2023-10-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 2461-2468 )
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