茵陈蒿汤协同脐带间充质干细胞所释放的外泌体对急性肝衰竭及肝细胞焦亡的影响
谢丹
欧阳石
广州医科大学附属第五医院感染性疾病科,广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室(广州 510515)
摘要：目的 探讨茵陈蒿汤协同脐带间充质干细胞胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UcMSCs)对体内外急性肝衰竭(Acute liver failure,ALF)模型肝损及肝细胞焦亡的影响及相较单一药物作用的区别.方法 分离ucMSCs,通过电镜及流式鉴定.超速离心法分离ucMSCs外泌体(ucMSCs-exo),采用纳米颗粒跟踪分析软件(NTA)、透射电镜、Western blot鉴定ucMSCs-exo的CD63、CD9.通过100 ng/mL脂多糖(LPS)和5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)刺激人肝细胞株LO2细胞构建ALF体外模型.将细胞随机分为正常对照组、模型组、茵陈蒿汤治疗组、ucMSCs-exo治疗组和联合治疗组.在电子显微镜下观察LO2形态改变,流式分析检测LO2 细胞的死亡率,Western blot检测焦亡相关蛋白Caspase-1及Cleaved-Caspase-1的表达,ELISA检测焦亡相关细胞因子IL-1β、IL-18的表达.再将50只6～8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、茵陈蒿汤治疗组、ucMSCs-exo治疗组及联合治疗组,每组10只.采用腹腔内注射10 μg/kg LPS和800 mg/kg D-氨基半乳糖(D-GalN)构建ALF小鼠模型,造模成功后各组分别给予相应药物干预,ucMSCs-exo组和联合治疗组尾静脉注射ucMSCs-exo干预,持续给药3 d.干预12 h后收集各组血清标本及肝脏组织,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的表达水平,HE染色肝脏组织观察其病理改变.结果 在ALF体外模型中,茵陈蒿汤治疗组、ucMSCs-exo治疗组及联合治疗组抑制肝细胞死亡(P<0.05),且联合治疗组的肝细胞死亡率下降的最显著(P<0.05).通过初步探索其对肝细胞焦亡的作用,发现相较于单一药物治疗组而言,联合治疗组能显著降低焦亡相关蛋白Cleaved-Caspase-1及细胞因子IL-1β、IL-18的表达(P<0.05),但Caspase-1的表达比较无统计学意义(P>0.05).同样在ALF体内模型中,单一茵陈蒿汤治疗组、单一ucMSCs-exo治疗组及联合治疗组能够有效降低血清ALT、AST水平(P<0.05),减轻肝细胞坏死及炎症细胞的浸润.并且与单一药物治疗组相比较而言,联合治疗组在血清ALT、AST的降低程度及肝组织中炎症细胞的浸润、细胞死亡程度均有进一步的降低(P<0.05).结论 茵陈蒿汤联合ucMSCs-exo对ALF体内外模型的保肝作用显著优于单一茵陈蒿汤治疗或单一ucMSCs-exo治疗,且在体外ALF模型中能够显著抑制肝细胞焦亡.
关键词：急性肝衰竭茵陈蒿汤脐带间充质干细胞肝细胞焦亡外泌体
分类号：R575.3(消化系及腹部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81803884)广州医科大学科研能力提升项目(02-410-2302092XM)广州医科大学学生创新能力提升计划项目(02-408-2203-2064)广州医科大学学科建设项目(02-410-2206013)广州医科大学本科生能力提升创新项目(2022JXA003)市校(院)企联合资助项目(2023A03J0421)北京肝胆相照公益基金会资助项目(iGandanF-1082023-RGG023)广州市医学重点学科项目(2021-2023)广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室(2021KSYS009)
论文发表日期：2023-12-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 3034-3042 )
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