微滴式数字PCR技术快速诊断侵袭性念珠菌病的方法建立
何志捷1
李伟超2
何铭辉3
陈晓彤2
林钊3
植耀炜2
1.广州新华学院康复医学系(广东广州 510520)2.中山大学孙逸仙纪念医院(广东广州 510000)3.广州永诺医学检验所有限公司(广东广州 510000)
摘要：目的 建立基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术快速检测重症患者侵袭性念珠菌感染的方法.方法 基于微滴式数字PCR平台建立检测体系,设计四种念珠菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带滑念珠菌)特异性引物探针;(1)对无模板对照(no tmplate contral,NTC)样品进行检测,确定空白限(limit of blank,LOB)范围和阳性判断值;(2)通过对阳性样本进行稀释,每个浓度梯度各进行10次重复提取检测,确定检测限(limit of detection,LOD)范围;(3)重复检测稀释后的样本,确定定量限(limit of quantitation,LOQ)范围;(4)对阳性样品进行梯度稀释,确定线性范围;(5)通过2个高低浓度的阳性样本提取检测,进行12次重复性测试,计算结果浓度对数值的变异系数(CV);(6)通过具有真菌培养结果的临床样本进行检测,评估方法可靠度.结果 ddPCR检测念珠菌LOB在0～81 copies/mL之间,阳性判断值为≥3个阳性微滴;LOD为3×102 copies/mL;LOQ为3×102copies/mL;不同浓度梯度检测线性范围是3×102～3×107copies/mL,相关系数为:白色念珠菌R2=0.999 5、光滑念珠菌R2=0.998 9、近平滑念珠菌R2=0.999 4、热带滑念珠菌R2=0.999;结果 浓度对数值的CV<5%,满足精密度要求;通过检测建立方法初步验证临床标本,结果与临床培养结果一致.结论 ddPCR对重症患者侵袭性念珠菌感染的检测灵敏度高、重复性好,特异性高.
关键词：微滴式数字PCR侵袭性念珠菌病快速诊断
分类号：R446(诊断学)
资助基金：广东省基础与应用基础研究基金项目(2022A1515011248)
论文发表日期：2024-10-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 2738-2746 )
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