Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p靶向SKP2缓解支气管肺发育不良
蒋焰1
王小勤2
梅鸿3
刘鑫鑫3
廖贞亮3
余琨3
冯帮海4
覃松3
1.遵义医科大学附属医院小儿内二科(贵州遵义 563000)2.遵义医科大学第二附属医院小儿内科(贵州遵义 563000)3.遵义医科大学附属医院重症医学科(贵州遵义 563000)4.遵义市中医院重症医学科(贵州遵义 563000)
摘要：目的 探讨来源于Ⅱ型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)外泌体(exo-somal,Exos)-miR-21-5p(简称 miR-21)靶向 S期激酶相关蛋白 2(S-phase kinase associated protein 2,SKP2)对支气管肺泡发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护效应及作用机制.方法 使用60只6～8周龄的SD大鼠,其中30只通过差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并进行培养.密度梯度离心法用于获得AEC-Ⅱ来源的外泌体,密度梯度离心法用于提取AEC-Ⅱ培养基中囊泡,并通过透射电镜及粒径分析对其验证,双荧光素报告基因实验以确认miR-21与SKP2的靶向关系.剩余的30只大鼠按照3:1的雌雄比例混合,以便于进行怀孕检测.将这些新生小鼠随机分为4个不同的实验组:空气对照组(Con组)、高氧处理组(BPD+PBS组)、接受高氧和外泌体治疗的小鼠(BPD+Exos-miR-21组),以及高氧联合外泌体miR-21抑制剂处理组(BPD+Exos-AV-miR-21组).新生SD大鼠将暴露于85％的氧气环境中,以此建立BPD模型.经过14d高氧处理后,使用RTq-PCR技术检测肺组织和外泌体中miR-21的表达水平.肺组织经HE染色观察其病理学变化,并计算了平均肺泡线性截距(MLI)和放射状肺泡计数(RAC).分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)的水平,荧光分光光度法测定活性氧簇(ROS)水平.此外,利用Western blot技术检测了 SKP2、NR2F2和VEGF-A蛋白的表达水平.结果 电镜及粒径分析结果显示AEC-Ⅱ细胞提取的小泡结构物质属于外泌体,miR-21在外泌体中表达显著上调(P＜0.01),双荧光素酶基因报告实验证实SKP2为miR-21的作用靶标.与Con组比较,BPD+PBS组及BPD+Exos-AV-miR-21组肺组织HE可见肺组织结构紊乱,肺泡增大、简化,ROS、MDA、MLI增高及SKP2蛋白表达升高(P＜0.01);而 RAC、SOD、T-AOC、miR-21 下调及 NR2F2、VEGF-A 蛋白表达降低(P＜0.01);与 BPD+PBS 组比较,BPD+Exos-miR-21组肺组织HE可见无肺泡数目增加,肺泡简化程度好转,同时MLI、ROS、MDA降低及SKP2蛋白表达降低(P＜0.01);而ROC、SOD、T-AOC、miR-21上调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达升高(P＜0.01).结论 AEC-Ⅱ来源的Exos-miR-21可能靶向SKP2通过促进NR2F2、VEGF-A蛋白表达抑制氧化应激促进肺泡发育改善BPD.
关键词：Ⅱ型肺泡上皮细胞外泌体微小RNA-21-5p支气管肺发育不良S期激酶相关蛋白2
分类号：R563.9(呼吸系及胸部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81960362)贵州省科技计划项目(ZK(2022)-660,ZK-2023-544,ZK(2024)-320,ZK(2024)-299)贵州省卫生健康委科学技术基金项目(gzwkj2024-310)
论文发表日期：2024-12-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 3298-3305 )
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