基于施孔数法筛选抗胎儿血红蛋白单克隆抗体及其在初步诊断β地中海贫血方法中的应用
尹茉莉
徐婧哲
闫宇
童祯骁
刘磊
王会岩
吉林医药学院,吉林省抗体工程科技协同创新中心,吉林吉林 132013
摘要：目的 建立初步诊断β地中海贫血(BT)双抗体夹心ELISA方法.方法 利用施孔数法筛选分泌抗胎儿血红蛋白(HbF)单抗的杂交瘤细胞株,采用ELISA、改良免疫细胞化学、Western blot方法进一步评价抗体的性质,采用戊二醛标记方法将碱性磷酸酶(ALP)和抗HbF单抗进行偶联,筛选最佳配对抗体用于双抗夹心ELISA方法,对40份临床血样进行检测.结果 筛选到9株高亲和力分泌抗HbF单抗的杂交瘤细胞株,其中4株HbF单抗(3F7、4G1、6C1、9H7)与HbF特异性结合,与血红蛋白(HbA和HbA2)不发生交叉反应,抗体最高效价为1:256000,亲和力最高可达到2.36×108 L/mol.与高效液相色谱法比,以3F7作为捕获抗体与ALP-4G1配对建立的双抗夹心ELISA方法通过定量检测HbF含量以区分胎儿和健康人血样,其敏感度达80％.结论 建立的夹心ELISA方法能够准确测量HbF水平,为临床上诊断BT提供帮助.
关键词：胎儿血红蛋白单克隆抗体定量检测施孔数法
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：吉林省科技厅项目(20210204186YY)
论文发表日期：2025-01-24
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 271-277 )
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