Toll样受体4在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞铁死亡中的作用
翟俊杰1
温少莹2
李心如3
孙睿4
祁宁4
张启凡4
杨力5
黄晖5
马凌桔6
郝银菊1
姜怡邓1
李桂忠2
马胜超2
1.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004)2.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004);宁夏医科大学基础医学院(宁夏 银川 750004)3.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004);宁夏医科大学检验学院(宁夏 银川 750004)4.宁夏医科大学检验学院(宁夏 银川 750004)5.宁夏医科大学总医院老年与特需医学科(宁夏 银川 750004)6.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004);宁夏医科大学总医院老年与特需医学科(宁夏 银川 750004)
摘要：目的 探讨Toll 样受体4在调控同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导巨噬细胞铁死亡中的作用.方法 培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)和同型半胱氨酸+铁死亡抑制剂组(Hcy+Fer-1);巨噬细胞转染干扰片段后予同型半胱氨酸干预,设置对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)、TLR4干扰阴性对照+同型半胱氨酸干预组(si-NC+Hcy)、TLR4干扰+同型半胱氨酸干预组(si-TLR4+Hcy);巨噬细胞转染过表达慢病毒后予同型半胱氨酸干预,对照组(Control)、同型半胱氨酸干预组(Hcy)、TLR4过表达阴性对照+同型半胱氨酸干预组(OE-NC+Hcy)、TLR4过表达+同型半胱氨酸干预组(OE-TLR4+Hcy);干预细胞48 h后,实时荧光定量PCR和Western blot检测Hcy干预的巨噬细胞中TLR4表达水平;Western blot检测巨噬细胞中铁死亡相关蛋白ACSL4、GPX4及FTH1表达水平;采用铁离子试剂盒检测巨噬细胞内Fe2+浓度;采用ROS试剂盒及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧的含量.结果 与Control组相比,Hcy组促铁死亡相关蛋白ACSL4的表达水平升高(P<0.05),抗铁死亡相关蛋白GPX4与FTH1的表达水平降低(P<0.05),Fe2+浓度升高(P<0.05),ROS含量增多,同时Hcy组中TLR4蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05);巨噬细胞转染TLR4干扰片段后,与si-NC+Hcy组相比,si-TLR4+Hcy组中GPX4与FTH1表达水平增高(P<0.05),ACSL4表达水平降低(P<0.05),Fe2+浓度降低(P<0.05),ROS含量减少;巨噬细胞转染TLR4过表达慢病毒后,与OE-NC+Hcy组相比,OE-TLR4+Hcy组中GPX4与FTH1表达水平降低(P<0.05),ACSL4表达水平升高(P<0.05).结论 Hcy诱导巨噬细胞铁死亡的发生,而Toll样受体4对Hcy诱导的巨噬细胞铁死亡有正向调控作用.
关键词：TLR4巨噬细胞同型半胱氨酸铁死亡
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81900273)国家自然科学基金(82060139)国家自然科学基金(82270492)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2019BEG03006)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BEG02054)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2023BEG02074)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BFH02013)宁夏自然科学基金优秀青年项目(2023AAC05035)宁夏医科大学揭榜挂帅项目(XJKF240301)宁夏医科大学揭榜挂帅项目(XJKF240305)
论文发表日期：2025-02-09
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 313-321 )
英文信息