环状RNA mmu_circ_0000818在地塞米松导致的MC3T3-E1细胞凋亡中的作用及机制
杨慧霞1
丁宁1
马润秋2
李桂忠1
郝银菊3
马胜超4
姜怡邓2
白志刚5
1.宁夏医科大学 基础医学院(宁夏 银川 750004);宁夏医科大学 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004)2.宁夏医科大学 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004)3.宁夏医科大学 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004);宁夏医科大学总医院(宁夏 银川 750004)4.宁夏医科大学 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004);宁夏医科大学 检验学院(宁夏 银川 750004)5.宁夏医科大学 国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室(宁夏 银川 750004);宁夏回族自治区人民医院(宁夏 银川 750004)
摘要：目的 筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制.方法 (1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dexamethasone(DEX)组;(2)采用Western blot检测各组细胞BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;(3)提取正常和DEX处理的MC3T3-E1细胞RNA,进行RNA测序,筛选出差异表达的circRNAs,并通过GO和KEGG分析其功能;(4)筛选出差异表达的mmu_circ_0000818并进行细胞水平验证以及UCSC Genome Browser Gateway和circbase网站分析mmu_circ_0000818在染色体的位置和保守性;(5)构建mmu_circ_0000818过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)并转染细胞,流式细胞术检测各组MC3T3-E1细胞凋亡情况.结果 (1)与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞凋亡升高(P<0.01);(2)根据log2foldchange(≥2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的circRNAs,与Control组相比,DEX组中共有234个表达差异的circRNAs,其中上调的138个,下调的96个.差异表达circRNAs的靶基因利用GO和KEGG进行富集分析,Apoptosis(凋亡)和PI3K-Akt signaling pathway(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路)差异最显著.(3)qRT-PCR结果显示,与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞中mmu_circ_0000818表达明显升高(P<0.01),UCSC Genome Browser Gateway和circbase分析发现mmu_circ_0000818主要位于17:78712463-78715086,由Crim1基因第6～7外显子环化形成并且在不同物种间具有高的保守性.(4)流式细胞术结果提示抑制mmu_circ_0000818 可改善DEX引起的MC3T3-E1 细胞凋亡,过表达则促进其凋亡.结论 mmu_circ_0000818在DEX处理的MC3T3-E1细胞中显著增高,降低其可抑制DEX引起的细胞凋亡.
关键词：环状RNA mmu_circ_0000818地塞米松MC3T3-E1细胞RNA测序凋亡
分类号：R285.5(中药学)
资助基金：国家自然科学基金(82060412)国家自然科学基金(U21A20343)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2020BFH02001)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BEG02054)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BFH02013)宁夏回族自治区重点研发计划项目(2023BEG02074)
论文发表日期：2025-02-24
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 478-489 )
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