屋尘螨诱导的自噬通过β-catenin-Snail信号通路影响气道上皮屏障功能
曾紫菱1
王星2
唐红梅2
王志彬2
马宁2
李月蛟2
王孝芸2
袁谢芳2
徐国锋2
王巧巧3
张汶3
段佳瑶1
张沄1
1.西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室,(四川 泸州 646000);西南医科大学附属医院呼吸与危重症医学科(四川 泸州 646000)2.西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室,(四川 泸州 646000)3.西南医科大学附属医院呼吸与危重症医学科(四川 泸州 646000)
摘要：目的 探讨屋尘螨(house dust mites,HDM)诱导的细胞自噬通过β-catenin-Snail信号途径影响气道上皮紧密连接的机制.方法 使用不同时间点(0、3、6、12、24、48 h)和不同浓度的HDM(0、40、100、200 μg/mL)刺激人支气管上皮细胞(16HBE),筛选合适的刺激浓度和刺激时间.使用氧化应激抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、HDM以及它们联合刺激16HBE细胞.使用mCherry-EGFP-LC3B、Beclin-1-siRNA、ATG14-siRNA慢病毒转染细胞,然后用NAC和HDM刺激细胞.免疫荧光检测气道上皮细胞中自噬相关蛋白LC3B和紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1的表达水平;采用DCFH-DA检测各组细胞中活性氧(ROS)水平;Western blot检测Occludin、ZO-1、LC3B、Beclin-1、ATG5、ATG14、P62、Snail、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达水平.结果 免疫荧光结果显示,与对照组比较,200 μg/mL HDM刺激可以显著诱导细胞自噬(P<0.05),增加LC3B蛋白表达水平(P<0.05),同时促进ROS水平(P<0.05);与HDM组相比,HDM+3-MA组、HDM+ATG14-si组和HDM+Beclin-1-si组的紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1的表达水平明显增高(P<0.05),HDM+NAC组ROS水平明显下降,且LC3B蛋白表达水平明显降低.Western blot实验结果显示,与HDM组相比,3-MA和自噬蛋白低表达珠(Beclin-1-si、ATG14-si)可以减轻HDM诱导的细胞自噬(P<0.05),同时抑制HDM诱导的Snail、p-β-catenin表达上调,改善HDM诱导的Occludin、ZO-1降低(P<0.05);与HDM组相比,NAC+HDM组LC3BⅠ向LC3BⅡ的转化减少(P<0.001),Snail、p-β-catenin、Beclin-1、ATG14蛋白水平明显降低(P<0.01),而Occludin、ZO-1蛋白水平明显升高(P<0.05).结论 HDM通过引起细胞自噬影响气道上皮细胞间的紧密连接,其机制可能与β-catenin-Snail信号通路有关.
关键词：屋尘螨细胞自噬气道上皮细胞紧密连接
分类号：R563(呼吸系及胸部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81900028)
论文发表日期：2025-05-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 1309-1318 )
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