新冠病毒BA.5高免疫原性RBD抗原制备及抗体开发
吴凡1
覃鸿妮2
谢钰珍1
任保永3
戴东升4
1.苏州工业园区服务外包职业学院(江苏 苏州 215000)2.苏州工业园区服务外包职业学院(江苏 苏州 215000);江苏省精准诊疗药物创制工程研究中心(江苏 苏州 215000)3.思格(苏州)生物科技有限公司(江苏 苏州 215000)4.优环(苏州)生物医药科技有限公司(江苏 苏州 215000)
摘要：目的 开发针对新冠病毒BA.5变异株的高免疫原性抗原,并筛选出具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为疫苗和诊断试剂的开发提供新策略.方法 将斑马鱼卵黄蛋白中的ZP蛋白基因片段和HIS蛋白标签插入pCDNA3.4质粒,构建pCDNA3.4-RBD(BA.5)-ZP-HIS重组载体,并转入293F细胞表达RBD-ZP蛋白.通过SDS-PAGE等方法验证蛋白表达,并检测其与ACE2受体分子和铝佐剂的结合能力.利用BALB/c小鼠模型评估融合蛋白的免疫原性,并通过杂交瘤技术制备单克隆抗体.筛选出具有强中和阻断活性的单克隆抗体,并通过阻断ELISA方法检测抗体的中和活性.结果 ZP基因和HIS蛋白标签序列插入到pCDNA3.4载体中,并成功表达出50 kDa的RBD-ZP蛋白.免疫原性检测结果表明,ZP蛋白有效增强了RBD蛋白的免疫原性,并提高了其与ACE2受体的结合能力.进一步用RBD-ZP蛋白对小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术克隆、筛选得到了8种能够与突变株和野生株特异性结合的单克隆抗体,其中3种能够有效阻断新冠病毒RBD蛋白与人体ACE2受体的结合.结论 本研究成功表达了RBD-ZP融合蛋白,显著增强了RBD蛋白的免疫原性和受体结合能力,并筛选出3种具有高效中和阻断活性的单克隆抗体,为新冠疫苗和诊断试剂的开发提供了有力支持.
关键词：新冠病毒RBD-ZP蛋白抗原制备单克隆抗体筛选
分类号：Q812(生物工程学(生物技术))
资助基金：国家自然科学基金(22077092)江苏省精准诊疗药物创制工程研究中心开放课题(SDGC2239)
论文发表日期：2025-09-10
在线出版日期：2025-09-18（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 2653-2660 )
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