维生素B12通过下调自噬增强HDM处理的人气道上皮细胞中ZO-1的表达
李月蛟1
蓝楠2
王星1
唐红梅1
王志彬1
张沄2
袁谢芳1
王孝芸1
1.西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室(四川 泸州 646000)2.西南医科大学附属医院呼吸与危重症医学科(四川 泸州 646000)
摘要：目的 探讨维生素B12(VB12)对屋尘螨(HDM)处理的人气道上皮细胞株(Beas-2b)中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达的影响及其作用机制.方法 用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养人气道上皮细胞株Beas-2b.将Beas-2b分为四组:Control、VB12、HDM、VB12+HDM.使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA和mcherry-EGFP-LC3等慢病毒转染Beas-2b.各转染组细胞用相应慢病毒(MOI=20)转染细胞12 h后换新鲜培养基,并用嘌呤霉素(1 µg/mL)进行筛选,获得稳定转染细胞株.分别用VB12(20 µg/mL)和HDM(50 µg/mL)刺激细胞24 h.免疫荧光和蛋白质印迹检测ZO-1、自噬相关蛋白5(ATG5)、苄氯素1(BECN1)和微管相关蛋白轻链3(LC3)的蛋白水平.共聚焦显微镜观察人气道上皮细胞自噬情况.结果 与Control组比较,HDM组的ZO-1表达降低(P<0.05),而ATG5、BECN1和LC3的表达升高(P<0.05);与HDM组相比,VB12+HDM组ZO-1表达升高(P<0.05),ATG5、BECN1和LC3的表达降低(P<0.01),且自噬体形成减少(P<0.05);ATG5和BECN1敲减细胞株中,HDM处理后ZO-1表达增加(P<0.05).结论 VB12可通过下调自噬增加HDM处理的人气道上皮细胞中ZO-1的表达,其作用机制与ATG5和BECN1信号途径相关.
关键词：维生素B12闭锁小带蛋白-1自噬自噬相关蛋白5苄氯素1
分类号：R563(呼吸系及胸部疾病)
资助基金：国家自然科学基金(82100021)西南医科大学校级科研项目(2023QN043)
论文发表日期：2025-11-10
在线出版日期：2025-11-20（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 3345-3351 )
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