甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备
林巧1
姚思敏2
张国良2
杨辉2
邓小凤2
杨榕青2
聂广2
郑学宝3
刘晋洪1
1.深圳市宝安区慢性病防治院,广东深圳,5181332.深圳市第三人民医院,广东深圳,5181123.广东医学院,广东东莞,523024
摘要：目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体.方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化.使用NA蛋白以100 μg/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证.结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09 NA基因,长度约1400 bp.将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50 kd.采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化.用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11.Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原.结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础.
关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶单克隆抗体
分类号：R511.7(传染病)
资助基金：国家自然科学基金(30771902)深圳市科技计划(201202063)东莞市科技计划(200910815229)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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