CRISPR-Cas9敲减猪GGTA1基因的质粒构建
牟丽莎
温春圣
谢崇伟
蔡志明
1.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180352.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180353.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180354.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳518035
摘要：目的:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,构建靶向猪GGTA1基因的敲减质粒.方法:将LentiCRISPR-v2质粒转化感受态DH5α进行扩增并提取该质粒,设计并合成靶向猪GGTA1基因的gRNA(guideRNA,gRNA)序列,对LentiCRISPR-v2质粒进行BsmBI酶切及电泳和胶回收,并将胶回收产物与gRNA序列进行连接,构建LentiCRISPR v2-gRNA重组质粒,将该重组子转化感受态DH5α,培养过夜后,将其涂布于含有氨苄青霉素(Ampicillin,AMP)的LB固体培养基,筛选阳性单克隆DH5α进行培养并提取质粒,对提取的LentiCRISPR-v2-gRNA敲减质粒进行KpnI与EcoRI双酶切验证与序列测定.结果:LentiCRISPR-v2载体酶切结果正确;目的gRNA序列成功插入酶切后的LentiCRISPR-v2载体且序列正确.结论:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功构建靶向猪GGTA1基因的敲减质粒,该研究为后续慢病毒的包装及CRISPR-Cas9系统敲减猪GGTA1基因的效率与功能研究奠定了基础.
关键词：基因敲减CRISPR-Cas9GGTA1基因
分类号：R-332(实验医学、医学实验)Q782(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家自然科学基金(81200465)深圳市三名工程(驯化器官)项目(2015)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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