CRISPR敲减猪CMAH基因的质粒构建及慢病毒的包装
牟丽莎
王蕾
谢崇伟
蔡志明
1.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180352.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180353.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180354.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳518035
摘要：目的:构建靶向猪CMAH基因的慢病毒CRISPR-Cas9敲减质粒及进行慢病毒的包装.方法:设计并合成CMAH基因gRNA的靶序列并将其与LentiCRISPR-v2载体连接;连接后转化大肠杆菌DH5α,筛选出重组子后酶切鉴定与测序;制备VSV-G、Rev、Gag/Pol等质粒用于包装慢病毒.结果:成功构建猪CMAH基因CRISPR-Cas9敲减质粒并包装出相应慢病毒.结论:利用CRISPR-Cas9基因编辑技术能够构建敲减猪CMAH基因的质粒并能够使用其包装出病毒,为后续感染猪动脉内皮细胞(porcine aorta endothelial cell,PAEC)细胞敲减CMAH基因及功能验证奠定基础.
关键词：慢病毒包装基因敲减CMAH基因CRISPR-Cas9
分类号：R-332(实验医学、医学实验)Q343.1(遗传学分支学科)
资助基金：国家自然科学基金(81200465)深圳市三名工程(驯化器官)项目(2015)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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