通过CRISPR-Cas9系统敲减PAEC中GGTA1和CMAH基因的效果检测
牟丽莎
白图雅
谢崇伟
蔡志明
1.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180352.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180353.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳5180354.深圳市第二人民医院,深圳大学第一附属医院,深圳市驯化器官医学工程技术研究开发中心,广东深圳518035
摘要：目的:检测由短回文重复序列(CRISPR)-Cas9系统敲减猪动脉内皮细胞(PAEC)中基因α1,3半乳糖基转移酶(GGTA1)和CMP-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)的效果.方法:通过CRISPR-Cas9系统,用已设计好的GGTA1和CMAH基因的guide RNA (gRNA)构建质粒,以慢病毒为载体包装病毒和感染PAEC,对成功感染的细胞进行单克隆培养并挑选收集单克隆细胞,提取细胞基因组,进行PCR,琼脂糖凝胶电泳,退火、酶切,测序等方法对GGTA1和CMAH基因敲减的效果进行检测.结果:对单克隆细胞进行选择性测序,选择V2-g-a1、V2-c-b1、V2-c-d4单克隆细胞测序结果分别为:V2-g-a1细胞基因组突变位点在第205位V2-c-b1细胞基因组突变位点在第240位;V2-c-d4细胞基因组突变位点在第246位.结论:CRISPR-Cas9系统成功构建质粒,完成慢病毒包装和感染细胞,成功敲减目的基因.
关键词：GGTA1CMAHCRISPR-Cas9PAEC单克隆细胞
分类号：R-332(实验医学、医学实验)Q754(分子遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(81200465)深圳市三名工程(驯化器官)项目(2015)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息