SYBR Green qPCR检测内镜活检胃组织石蜡标本幽门螺杆菌
郑玮
李倩
王营辉
厦门大学附属中山医院,福建厦门 361000
摘要：目的:建立一种高效、特异的检测内镜活检胃组织石蜡包埋标本幽门螺杆菌(Hp)实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法.方法:针对Hp 23S核糖体核糖核酸(rRNA)基因设计特异度引物,建立SYBR Green qPCR反应体系,并验证该方法的特异度、灵敏度和重复性.用该方法对20份内镜活检胃组织石蜡标本进行检测,同时作免疫组织化学染色分析.阳性扩增产物以Sanger测序法明确克拉霉素基因突变情况.结果:本研究qPCR方法具备良好特异度和灵敏度,最低可检测2.3×102 copies·μL-1的质粒脱氧核糖核酸(DNA).标准曲线表明其具有良好线性关系,直线方程为y=-3.6106x+44.626,R2为0.9879＞0.98.不同浓度标准品的批内变异系数为0.20％～2.19％,批间变异系数为1.24％～2.63％,均＜3％,表明该方法的稳定性和重复性良好.针对20份疑似感染Hp的内镜活检胃黏膜组织石蜡标本,该方法检出Hp阳性样品14份,阳性检出率为70％,免疫组织化学染色方法检出Hp阳性样品15份,阳性检出率为75％,二者的符合率为93.33％.阳性扩增产物经Sanger测序法测序显示均为Hp 23S rRNA基因片段,且14例样品中有5例存在克拉霉素耐药基因突变.结论:本研究建立的SYBR Green qPCR方法的特异度、灵敏度和重复性良好,后续阳性扩增产物的测序结果可明确克拉霉素耐药基因突变情况,适用于临床Hp感染和克拉霉素耐药性的检测.
关键词：幽门螺杆菌SYBRGreen实时荧光定量聚合酶链式反应Sanger测序法克拉霉素耐药性
分类号：R372(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：福建省卫生健康青年科研项目(2022QNB015)
论文发表日期：2023-10-16
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 55-58,后插4 )
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