人骨形态发生蛋白-2基因的真核表达载体构建
沈伟
郭善一
鲍秋野
梁东春
张镜宇
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摘要：目的：利用杆状病毒载体，构建可直接转染昆虫细胞Sf 9 的含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的重
组穿梭载体(bacmid DNA)，最终获得重组蛋白。方法：将编码包含hBMP-2 N-端信号肽，中间前肽以及C-端成熟肽
共1188bp的cDNA片断，插入真核表达载体pFastBacl的多克隆位点，受控于pPolh启动子，构建成pFastBacl/
hBMP-2重组转移载体。重组子转化大肠杆菌DH10Bac。转座后，挑选阳性菌落，提取bacmid DNA，经PCR鉴定
后，以重组bacmid DNA转染Sf9细胞。收集重组病毒，扩大转染Sf9，表达产物行SDS-PAGE初步鉴定。结果：获
得了含hBMP-2全长cDNA片段的重组bacmid DNA和重组病毒，经SDS-PAGE证实在昆虫细胞中表达了分泌型
hBMP-2蛋白，经激光密度扫描仪扫描显示分泌性蛋白表达量占细胞蛋白总量的35.6％。结论：利用杆状病毒载
体成功构建了可用于直接转染昆虫细胞而无需同源重组的重组bacmid DNA，并在昆虫细胞中表达了分泌型
hBMP-2蛋白。
关键词：骨形态发生蛋白质类杆状病毒科转染基因表达
分类号：R68(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
论文发表日期：2001-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 88-90 )
英文信息