人源抗HBsAg单链抗体与白细胞介素2融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达
陈文吟
粟宽源
饶桂荣
余宙耀
1.510602,广州,空军广州医院肝病研究所2.510602,广州,空军广州医院肝病研究所3.510602,广州,空军广州医院肝病研究所4.510602,广州,空军广州医院肝病研究所
摘要：目的:探讨抗HBsAg单链抗体与白细胞介素2融合蛋白在巴氏毕赤酵母(P.Pastoris)中的表达以及初步的纯化、活性鉴定方法.方法:用PCR将目的蛋白基因从质粒PGEM7Zf(+)-HBScFv-IL-2上扩增出来,再亚克隆到酵母表达载体pPICZaA中,转化P.Pastoris宿主菌GS115,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定转化子,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定表达产物;再通过亲和层析法纯化目的蛋白;用间接ELISA实验鉴定其活性.结果:表达的重组蛋白分子质量约为44ku,表达量可达12%;纯化后凝胶成像分析目的蛋白的纯度达到95%;重组融合蛋白能与HBsAg、鼠抗IL-2单克隆抗体特异性结合.结论:成功构建了抗HBsAg单链抗体与IL-2融合蛋白酵母表达工程菌,并初步建立了对目的蛋白的纯化及活性鉴定方法.
关键词：肝炎抗体白细胞介素2重组融合蛋白质类毕赤酵母基因表达
分类号：R3(基础医学)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 752-754 )
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