高效化学转化菌内同源重组法构建重组腺病毒
尹冰楠
李冬田
李秋香
佟惠春
李光明
1.300070,天津医科大学医学微生物学教研室2.300070,天津医科大学医学微生物学教研室3.300070,天津医科大学医学微生物学教研室4.300070,天津医科大学医学微生物学教研室5.300070,天津医科大学医学微生物学教研室
摘要：目的:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒AdEasy系统加以改进,为制备具有更高抗肿瘤疗效的生物治疗制剂奠定基础.方法:将自杀基因CD和HSV-TK插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中,PmeⅠ酶切后,用酚:氯仿抽提、乙醇沉淀或切胶回收纯化;分别采用电穿孔转化法和化学转化法将线性穿梭质粒(pAdTrackCMV-CDglyTK)与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌内实现同源重组;将重组腺病毒质粒rpAdEasyGFP-CDglyTK以脂质体介导至293细胞中进行包装、扩增.结果:采用切胶回收化学转化法获得阳性重组率最高(100%).经PCR、酶切以及测序等方法鉴定,证实融合自杀基因已成功插入腺病毒中.结论:对细菌内同源重组法构建重组腺病毒的方法进行了改进,在降低实验成本的同时获得了较原法更高的阳性重组率,并成功构建了复制缺陷性重组腺病毒rAd-CDglyTK.
关键词：胸苷激酶胞嘧啶脱氨酶腺病毒科肿瘤基因治疗
分类号：R3(基础医学)
资助基金：天津市卫生局资助项目(99KY047)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 437-440 )
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