治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定
饶桂荣
刘惠萍
何晓嫱
杨富强
莫国玉
陈光明
1.510600,广州解放军第458医院全军肝病中心2.510600,广州解放军第458医院全军肝病中心3.510600,广州解放军第458医院全军肝病中心4.510600,广州解放军第458医院全军肝病中心5.510600,广州解放军第458医院全军肝病中心6.510600,广州解放军第458医院全军肝病中心
摘要：目的:探讨治疗性双质粒HBVDNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况.方法:以脂质体转染试剂Lipofectamine TM 2000介导,将带有preS2+S基因的重组疫苗质粒pS2.S和带有hIL2+hIFNγ融合基因的重组佐剂质粒pFP分别转染COS-7细胞,同时设立空质粒转染和未转染细胞为对照组,于转染后24,48,72,96 h采用ELISA法检测细胞培养上清的HBsAg、融合蛋白白细胞介素(IL-2)及干扰素(IFN-γ)的表达,并测定融合蛋白的IL-2、IFN-γ活性,采用ECL Western blotting分析和鉴定目的蛋白preS2+S、IL-2及IFN-γ的分子质量大小.结果:双质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且48 h时目的蛋白的表达量达峰值,其中表达的融合蛋白具有较高的IL-2和IFN-γ的生物学活性,pS2.S和pFP的转染上清分别在30.6 ku和110 ku处有特异性阳性反应条带.结论:HBVDNA疫苗质粒pS2.S和佐剂质粒pFP在COS-7细胞的最佳表达时间是转染后48 h,并鉴定双质粒表达产物的分子质量大小分别为30.6 ku和110 ku.
关键词：肝炎疫苗乙型疫苗DNA转染质粒
分类号：R4(临床医学)
资助基金：国家科技攻关项目(2002AA223317)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 145-147 )
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