人破骨细胞分化因子基因启动子报告载体的构建
杨宇虹1
郑纺2
刘瑞2
王宝利2
1.300070,天津医科大学生化教研室2.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所卫生部激素与发育重点实验室
摘要：目的:构建能够报告人破骨细胞分化因子(ODF)基因启动子活性的表达载体.方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列(-2433～-1 243 bp和-1 262～+100 bp),通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM(R)-T Easy克隆载体上.利用特定的限制性内切酶位点,将这2个序列片段酶切后进行正确拼接并定向克隆到不含启动子的pEGFP-1报告基因载体上.将该重组质粒pEGFP-1-ODF瞬时转染成骨细胞系UMR106,检测其能否在ODF基因启动子(-2 358～+100 bp)的调控下表达报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP).结果:pEGFP-1-ODF经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致.细胞瞬时转染结果表明,pEGFP-1-ODF转染的UMR106能表达EGFP.结论:人ODF基因启动子报告载体的成功构建,为进一步研究ODF基因表达转录水平的调控机制奠定了基础.
关键词：破骨细胞分化因子启动区(遗传学)遗传载体人
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30300171)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 361-363,后插1 )
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