基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体
李晓霞1
朱志峰2
王宝利2
戴芳2
郭刚2
张镜宇2
1.300070,天津医科大学微生物教研室2.300070,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所
摘要：目的:构建骨保护素(OPG)N端片段的酵母表达载体.方法:OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码.以人基因组DNA为模板,PCR分别扩增外显子2和外显子3,并使外显子2的3'引物和外显子3的5'引物具有相互重叠的一段序列.以2种PCR产物混合物为模板,采用重组PCR扩增OPG N端编码序列,拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K.为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端,再次采用重组PCR策略,将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列(含单一限制酶位点BamHⅠ)与OPG N端编码序列拼接在一起,从BamHⅠ和EcoRⅠ位点插入pPIC9K.结果:得到了OPG N端酵母表达载体,测序证实插入序列正确.结论:重组载体的获得为基因工程研制具有生物活性的OPG N端片段奠定了基础.
关键词：破骨细胞成骨细胞聚合酶链反应克隆分子DNA重组
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30300171)天津市自然科学基金(043606811)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 753-755 )
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