Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒的构建及其表达特点
王建文
孙慧敏
季建
李筱荣
1.300070,天津医科大学眼科中心2.300070,天津医科大学眼科中心3.300070,天津医科大学眼科中心4.300070,天津医科大学眼科中心
摘要：目的:构建Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒,并在Hela细胞中表达以研究蛋白的定位和分泌特点.方法:以pGEM-T-MYOC质粒中MYOC为模板,用PCR介导的定点突变技术,得到Pro370Leu突变型MYOC基因(mMYOC),并定向亚克隆到真核表达质粒pDsRed2-N1上,得到pDsRed2-N1-mMYOC重组表达质粒,再用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后用脂质体包埋转染法转染Hela细胞,进行荧光显微镜观察,并用Western Blot分析蛋白分泌情况.结果:经酶切和DNA序列测定,证实重组质粒构建成功,mMYOC基因能在Hela细胞中表达,并且蛋白只定位在细胞质中,经Western Blot分析,mMYOC蛋白不能分泌到培养液中.结论:成功构建Pro370Leu突变型MYOC基因真核表达质粒pDsRed2-N1-mMYOC,并能有效表达,其表达的蛋白定位在细胞质,并且不能分泌.
关键词：青光眼开角型突变基因表达质粒转染Hela细胞
分类号：R3(基础医学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 846-849 )
英文信息