UNC5B基因靶向shRNA表达质粒的构建及体外RNA干扰
杨昀
邹丽
王勇
张进祥
1.430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科2.430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科3.430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科4.430022,华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科
摘要：目的:探讨人UNC5B基因的双链RNA在体外对UNC5B表达的干扰作用及其规律.方法:构建两个能产生UNC5B的发夹状RNA(shRNA)的质粒载体Pgenesil-UNC5B1及Pgenesil-UNC5B2作为实验组,并构建无关序列shRNA表达质粒Pgenesil-NC作为阴性对照,将3种质粒分别转染脐静脉内皮细胞(HUVEC).转染24h后,荧光倒置显微镜下观察质粒转染效率,用G418筛选得到稳定转染的细胞,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测UNC5B在HUVECs中的表达情况.结果:转染24 h后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,转染效率约为40%～50%.实验组经G418筛选后稳定转染的细胞UNC5B mRNA均受到抑制,两种UNC5B基因靶向shRNA表达质粒对HUVECs中UNC5B抑制率分别为88%和52%.结论:本研究所构建的UNC5B shRNA表达质粒可在体外高效特异地抑制UNC5B的表达,为进一步实验奠定了基础.
关键词：基因RNA小分子干扰质粒基因表达重组蛋白质类
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30500487)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 321-323 )
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