人类U5·116 ku蛋白基因片段的克隆
洪敬欣
邵洁
史雪彬
姚智
杨洁
1.300070,天津医科大学免疫学教研室2.300070,天津医科大学免疫学教研室3.300070,天津医科大学免疫学教研室4.300070,天津医科大学免疫学教研室5.300070,天津医科大学免疫学教研室
摘要：目的:构建人类U5·116 ku基因全长真核表达质粒.方法:从HeLa细胞中提取总体RNA,一步法合成单链cDNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,扩增出人类U5·116 ku基因两段连续的序列,首先分别克隆至pTZ57R/T载体,两段序列连接成全长后再定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒.结果:RT-PCR法获得U5·116 ku基因两段连续的序列,长度分别为1 672 bp和1 246 bp,分别与pTZ57R/T载体连接后,选择合适的酶切位点再连接成全长序列,然后将全长序列和pcDNA3.1(-)真核表达载体进行连接、转化、酶切鉴定及序列分析后,证实pcDNA3.1(-)-U5·116 ku重组质粒构建成功.结论:成功克隆了人类U5·116 ku的编码基因,并构建了其真核表达质粒pcDNA3.1(-)-U5·116 ku.
关键词：HeLa细胞基因表达遗传载体质粒克隆分子逆转录聚合酶链反应人U5·116 ku蛋白
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30670441)天津市科委项目(043802811)高等学校博士学科点专项科研基金(NCET-04-0245;20040062003)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 401-404 )
英文信息