含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染
张绍敏
毋中明
宋丹
李兰英
于德民
1.卫生部及天津市激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院,3000702.卫生部及天津市激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院,3000703.卫生部及天津市激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院,3000704.卫生部及天津市激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院,3000705.卫生部及天津市激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院,300070
摘要：目的:构建并转染含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB(rhPDGF-BB)非融合型表达载体,为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础.方法:从人脐静脉内皮细胞(human umbil ical vein endotllelial cell,HUVEC)中分离总RNA,行RT-PCR获得rhPDGF-BB cDNA,构建克隆质粒pMD 19-T/rhPDGF-BB,经测序正确后,再将该目的片段与真核表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs连接,转化E.coli DH 5a感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体,然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)并用免疫组化染色法鉴定.结果:PCR获得长度为681 bp的目的片段,经pSELECT-GFPzeo-mcs载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列(NM-033016)完全匹配.结论:成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达.
关键词：遗传载体绿色荧光蛋白质类仓鼠卵巢转染
资助基金：中国博士后科学基金项目(20070410766)天津市卫生局科技基金项目(07kz47)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 486-488,后插1 )
英文信息