大鼠Smad 7基因真核表达质粒的构建与鉴定
杨小艳1
郑勇2
李睿2
徐丽红2
周婷3
杨军3
1.石河子大学医学院第一附属医院老干一科,8320082.石河子大学医学院第一附属医院消化内科,8320083.石河子大学医学院第一附属医院中心实验室,832008
摘要：目的:构建并鉴定大鼠Smad 7/pcDNA3.1(+)真核表达质粒,为进一步研究Smad 7的抗肝纤维化作用提供实验基础.方法:TRIzol法抽提大鼠肝组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,紫外分光核酸蛋白分析仪测定其浓度与纯度,两步法获取大鼠Smad 7 cDNA片段,CaCl2法制备感受态细胞,应用EcoRl及XhoI在pcDNA3.1(+)多克隆位点处进行双酶切,切胶回收载体及目的片段酶切产物,将回收的线性化pcDNA3.1(+)与Smad 7 cDNA连接,构建Smad 7/pcDNA3.1(+)重组质粒,转化DH5α大肠杆菌,测序鉴定双酶切证实的阳性克隆.结果:电泳检测RNA的完整性良好,28S约为18S的2倍A260/A280=1.986,纯度较好,阳性克隆酶切后电泳检测在DNA Marker 1.3 kb处见Smad 7目的片段,5.4 kb处见线性化pcDNA3.1(+),与预期结果相符,质粒重组成功,并测序证实.结论:大鼠Smad 7真核表达质粒构建成功,为进一步单独或联合其他质粒从TGF-β/SMAD信号传导的不同环节干预肝纤维化提供了实验基础.
关键词：质粒DNA结合蛋白质类肝硬化克隆生物大鼠
资助基金：兵团博士基金(05JC08)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 891-893 )
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