HPV18E6基因的原核克隆及表达
姜海蓉1
彭方毅1
陈远翔1
陈盛珍1
林治华1
彭方亮2
赵卫兵3
1.重庆理工大学化学与生物工程学院,4000502.重庆市第四人民医院妇产科3.重庆市第四人民医院麻醉科
摘要：目的:构建pET32a(+)HPV18E6原核表达质粒并优化其表达条件,探讨喉癌组织中HPV18E6蛋白的表达及意义.方法:应用基因重组技术,构建pET32a(+)与HPV18E6的原核表达重组质粒,采用PCR方法扩增HPV18E6基因,经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞并进行阳性克隆筛选,用限制性内切酶酶切和核酸序列检测方法鉴定重组质粒DNA,将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3),用IPTG对重组质粒进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot方法鉴定表达蛋白的分子质量及特异性.结果:成功构建了原核表达质粒Pet32/HPV18E6, 限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的是目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV18E6蛋白得到高效原核表达,表达HPV18E6的工程菌BL21(DE3)的最佳诱导温度是37 ℃,诱导剂IPTG的浓度为1 mmol/L. 结论:HPV18E6融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV18E6蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础.
关键词：喉肿瘤癌基因表达原核细胞电泳聚丙烯酰氨凝胶印迹法蛋白质
资助基金：国家自然科学基金(30571714,60873103)国家自然科学基金(30830090)重庆市科委自然基金(CSTC,2008BB5331)重庆市教委自然基金(KJ090614)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 993-995 )
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