多拷贝水蛭素基因在毕赤酵母中的分泌型表达
马精彩
曹晓娜
熊蔚俐
李敬华
左爱军
孙蓓
梁东春
1.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,3000702.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,3000703.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,3000704.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,3000705.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,3000706.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,3000707.天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室,300070
摘要：目的:通过多拷贝克隆技术实现水蛭素(Hirudin)基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达.方法:利用基因重组技术,从pPIC9-Hirudin中扩增α-facor-Hirudin插入到载体pA0815中,并构建pA0815-(α-Hirudin)n多拷贝重组质粒,转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达,并鉴定表达产物活性.结果:PCR证实成功构建了水蛭素多拷贝毕赤酵母表达载体pA0815-(α-Hirudin)n,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实能成功高效分泌重组水蛭素,活性测定表明表达的水蛭素有良好的抗凝血活性.结论:成功构建了分泌型水蛭素多拷贝质粒,筛选出多拷贝稳定整合表达菌株,成功表达出具有抗凝血活性的1 600 ATU/mL重组水蛭素,为大规模表达纯化水蛭素蛋白及其临床应用奠定了基础.
关键词：毕赤酵母水蛭素基因质粒凝血酶
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 112-114,前插2 )
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