双启动子shRNA真核表达载体的构建
娜仁1
郭刚1
张瑞1
赵郁2
汪蓓蕾1
梁东春1
杨宇虹2
1.卫生部激素与发育重点实验室,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所,3000702.天津医科大学生化教研室
摘要：目的:构建含有双启动子的shRNA真核表达载体.方法:通过PCR分别扩增带有BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/E)和带有Bgl Ⅱ、HindⅢ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/H),用BamH Ⅰ与EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1(+)与PCR产物U6-B/E后进行连接,重组质粒命名为psPRO.再用BglⅡ与HindⅢ双酶切psPRO与PCR产物U6-B/H后进行连接,构建含有双启动子的shRNA真核表达载体.结果:酶切鉴定以及DNA测序结果显示载体构建成功.结论:构建双启动子的shRNA真核表达载体,使其在细胞中表达2个不同的siRNA,不仅筛选方便,而且可以通过建立这种模式化工具载体,为今后RNA干扰实验研究的开展和深入提供手段.
关键词：启动区(遗传学)遗传载体RNA小分子干扰聚合酶链反应重组遗传质粒
资助基金：天津市高等学校科技发展基金(20070232)天津市科技攻关计划重大科技项目(05YFGDSF02700)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 840-842 )
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