重组hIFN-α-2b-BCG的冻干制备及生物特性的研究
孙二琳
赵杰
范晓东
韩瑞发
1.天津医科大学第二医院、天津市泌尿外科研究所,3002112.天津医科大学第二医院、天津市泌尿外科研究所,3002113.天津医科大学第二医院、天津市泌尿外科研究所,3002114.天津医科大学第二医院、天津市泌尿外科研究所,300211
摘要：目的:研究重组hIFN-α-2b-BCG真空冷冻干燥的制备工艺,研究冻干后生物特性的变化.方法:采用真空冷冻干燥法制备重组BCG(rBCG),筛选最佳工艺参数.平板计数法比较冷冻干前后的活菌数,计算存活率.比较冻干前后rBCG的抗酸染色特征与形态,连续测定OD值,绘制生长曲线,酶联免疫吸附测定(ELISA)IFN-α-2b表达水平.PCR和抗性培养分析冻干后的质粒稳定性.结果:冻干后重组BCG为(6.51±0.33)x106CFU/mL,冻干前为(1.02±0.11)×107 CFU/mL,存活率约65%,达到BCG生物免疫治疗所需的活菌标准.冻干前后的菌落形态、生长曲线及抗酸染色特征无明显差异.质粒插入基因稳定率91.7%,丢失率为8.3%.冻干前后分泌IFN-α-2b水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功制备了重组hIFN-α-2b BCG冻干制剂,活菌数达到生物免疫治疗标准,其生物学特性和质粒稳定性均可耐受冷冻、低温与真空干燥过程中的不利影响.
关键词：干扰素α-2b卡介苗重组遗传质粒冷冻干燥法酶联免疫吸附测定
资助基金：国家科技重大专项(2009ZX09103-699)国家自然科学基金(30872587)天津市科技支撑计划重大项目(07ZCKFSH03200)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 929-932 )
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