利用Cre/loxP系统构建无标记的htrA基因缺失的变链菌突变株
张文娟
于丹妮
韩育植
任志明
1.天津医科大学第二医院口腔科,3002112.天津医科大学第二医院口腔科,3002113.天津医科大学第二医院口腔科,3002114.天津医科大学第二医院口腔科,300211
摘要：目的:利用Cre/loxP位点特异性重组系统构建口腔变异链球菌htrA基因缺陷株,并删除选择标记.方法:PCR扩增变链菌的htrA基因片段并克隆到pGEM-T-Easy TA载体.随后插入卡那霉素(Km)抗性基因盒(loxP-Km-loxP)并替换htrA基因的部分序列,使htrA基因失活,构建出htrA基因缺失的同源重组载体pIB△htrA-Km.将该质粒电转化变链菌标准株,抗生素筛选出发生同源重组的菌株,再用含cre基因的热敏质粒pCrePA电转化,删除Km抗性基因.在限制性温度下培养,消除质粒pCrePA,获得无标记的变链菌htrA基因缺陷株,经PCR及DNA测序鉴定.结果:PCR及DNA测序分析证明htrA基因的部分序列及Km抗性基因均被删除,该部位只留下一个IoxP位点.结论:成功构建出了变链菌htrA基因缺失突变株,并删除了抗性标记,为进一步研究htrA基因缺失对变链菌致龋毒力的影响奠定了基础.
关键词：链球菌变异丝氨酸内肽酶类整合酶类重组遗传基因缺失聚合酶链反应质粒
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 108-111 )
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