人源Fab段噬菌体抗体库的构建及抗IL-4抗体的初步筛选
胡占东1
公倩2
朱铁虹2
畅继武1
1.天津医科大学第二医院泌尿外科研究所,3002112.天津医科大学总医院
摘要：目的:构建大容量人源Fab段噬菌体抗体库,从中筛选抗白细胞介素(IL)-4的抗体元件,为人源抗体的制备建立平台.方法:采集18例健康成人外周血,分离淋巴细胞,从中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应(HT-FCR)法扩增Fab段抗体基因,插入噬菌粒pComb3XSS载体内,构建噬菌体抗体元件库,用内切酶鉴定基因片段的插入.以抗原IL-4对抗体库进行富集筛选.筛选后,随机抽取菌株通过噬菌体-酶联免疫吸附法(Phage-ELISA)进行检测,并且对阳性克隆DNA的序列进行测定.结果:构建的人源Fab段噬菌体抗体库库容为2.4×108,酶切鉴定插入基因片段大小正确,从中筛选到与IL-4有结合活性的克隆.ELISA特异鉴定阳性,测序结果证实为人免疫球蛋白可变区基因片段.结论:成功构建了大容量人源化噬菌体抗体元件库,并初步获得人源性抗IL-4-Fab抗体,为大规模制备人源IL-4抗体和检测血中IL-4水平奠定了基础.
关键词：淋巴细胞细菌噬菌体遗传工程免疫球蛋白Fab片段白细胞介素4逆转录聚合酶链反应
资助基金：天津市科委重点项目(034608411)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 493-495,后插2 )
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