Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立
于利
辽宁医学院生理教研室,121001
摘要：建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白(prestin)的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株(CHO).方法:采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400～800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素(200～400 mg/L).收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),对扩增产物进行凝胶电泳分析.采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达.结果:采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性；利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率＞90％.结论:成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高.
关键词：CHO细胞分子马达蛋白质类耳蜗毛细胞听觉外质粒转染逆转录聚合酶链反应荧光免疫测定
资助基金：辽宁省教育厅科学技术研究项目基金资助项目(L2010267)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 625-627 )
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