靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建
罗远材1
瞿全新1
糜若然2
张灏3
1.300192,天津市第一中心医院妇产科2.天津医科大学总医院妇产科3.天津医科大学基础医学院细胞形态学教研室
摘要：目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体.方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连人pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化；所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果.结果:HPVISE6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构；重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功；成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达.结论:成功构建了HPV 18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具.
关键词：人乳头瘤病毒18癌基因RNA干扰质粒转染HeLa细胞逆转录聚合酶链反应
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 813-816 )
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