重组真核质粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的构建及表达
朱梦瑜1
高星杰2
钱宝鑫1
葛林3
赵虹1
赵秀娟1
杨洁4
1.300070,天津医科大学免疫教研室2.300070,天津医科大学基础医学研究中心3.300070,天津医科大学生化教研室4.300070 天津医科大学生化教研室;300070 天津医科大学基础医学研究中心
摘要：目的:将人类G3BP(Ras-GTPase activating protein SH3 domain binding protein)蛋白Domain (1～5)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使G3BP蛋白各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达.方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切法将目的片段连接到pEGFP-C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况.结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达.结论:重组pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)质粒成功构建并表达.
关键词：绿色荧光蛋白质类质粒基因表达印迹法蛋白质重组融合蛋白质类限制性内切酶图谱法
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2007AA02Z115)国家自然科学基金(30970582)天津市应用基础研究计划(07JCZDJC07300)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 990-992 )
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