双启动子shRNA表达载体对hTERT和bcl-2基因表达的抑制作用
张金晓
张瑞
汪蓓蕾
郭刚
1.300070,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所2.300070,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所3.300070,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所4.300070,天津医科大学代谢病医院内分泌研究所
摘要：目的:研究双启动子shRNA表达载体对人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)基因表达的抑制作用.方法:分别从构建好的大肠杆菌DH5α菌体中提取含有双启动子shRNA的表达载体pdPRO-TB、单启动子对照pdPRO-T、pdPRO-B和阴性对照质粒pdPRO,通过脂质体介导瞬时转染Hela细胞,倒置显微镜下观察细胞形态.实时荧光定量RCR检测hTERT和bcl-2基因的表达水平.结果:4种菌体中均提取出5 000 bp左右的质粒,分别转染Hela细胞48 h后,可见转染pdPRO的Hela细胞形态无明显变化,转染pdPRO-T和pdPRO-B的Hela细胞有部分悬浮,转染pdPRO-TB的Hela细胞有大量悬浮.各载体质粒构建均成功,各目的基因相对管家基因的含量:T(hTERT)=39.8％,B(hTERT)=107.9％,TB(hTERT) =32.1％;T(bcl-2)=91.4％,B(bcl-2)=35.4％,TB(bcl-2)=31.4％.结论:双启动子shRNA表达载体构建成功,可同时抑制hTERT和bcl-2基因的表达.
关键词：端粒末端转移酶基因bcl-2转染HeLa细胞shRNA
资助基金：国家自然科学基金(30571617)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 480-482,后插3 )
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