p100蛋白慢病毒干扰载体及p100沉默的HepG2稳定细胞系的构建
黄丽1
尹洁2
丁建民3
宋娟4
高星杰2
经翔3
杨洁5
1.300070,津医科大学免疫教研室2.300070,天津医科大学基础医学研究中心3.天津市第三中心医院4.300070,天津医科大学免疫教研室5.300070 天津医科大学免疫教研室;300070 天津医科大学基础医学研究中心
摘要：目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系.方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA并构建p LKO.3G-p1001慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定.将构建好的p100 shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒.运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,利用Western blot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果.结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株.慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90％以上细胞发出绿色荧光,Western blot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低.结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系.
关键词：RNA干扰细胞系肿瘤质粒慢病毒载体p100蛋白HepG2细胞系
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2007AA02Z115)国家自然科学基金(30970582、31100967、31170830)国家自然科学基金(90919032)高等学校博士学科点专项科研基金(20091202110001)中国博士后科学基金(2011M500529)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 529-532,后插1 )
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